Vigilancia de laboratorio de dengue y otros arbovirus en Cuba, 1970-2017 / Laboratory surveillance of dengue fever and other arboviruses in Cuba, 1970-2017

Los arbovirus constituyen una de las principales causas de emergencia en salud por la morbilidad y mortalidad que producen y el estrés sanitario que conllevan. Cuba no ha estado excenta de riesgo, y el enfrentamiento del dengue inicialmente y de otros arbovirus después, ha sido, y es, una prioridad de las máximas autoridades del país. La vigilancia de laboratorio de dengue se estableció desde inicios de la década del 70 aunque sus objetivos y estrategias han cambiado según la situación epidemiológica nacional y regional y la tecnología de diagnóstico disponible. Se destacan cuatro etapas en su desarrollo. En este trabajo se resumen las estrategias desarrolladas para la vigilancia de laboratorio de dengue y de otros arbovirus en el periodo de 1970 a 2017. Se describe además el papel desempeñado por el Instituto de Medicina Tropical, ¨Pedro Kouri¨ (IPK) como Laboratorio Nacional de Referencia(AU)

Arboviruses are one of the leading causes of health emergencies due to their morbidity and mortality and the sanitary stress they bring about. Cuba has not been free from risk, and the response first to dengue fever and then to other arboviruses has been and still is a priority for the country's top authorities. Laboratory surveillance of dengue fever was implemented in the 1970s, though its aims and strategies have evolved in keeping with the national and regional epidemiological situation, and the available diagnostic technology. Four stages stand out in the development of dengue laboratory surveillance. The present paper summarizes the strategies developed for laboratory surveillance of dengue fever and other arboviruses in the period 1970-2017. A description is also provided of the role played by Pedro Kourí Tropical Medicine Institute (IPK) as a national reference laboratory(AU)

Comparison of a modified shell vial culture procedure with conventional mouse inoculation for rabies virus isolation

Rabies is a neurotropic disease that is often lethal. The early diagnosis of rabies infection is important and requires methods that allow for the isolation of the virus from animals and humans. The present study compared a modified shell vial (MSV) procedure using 24-well tissue culture plates with the mouse inoculation test (MIT), which is considered the gold standard for rabies virus isolation. Thirty brain samples (25 positive and 5 negative by the fluorescent antibody test) obtained from different animal species at the National Institute of Hygiene Rafael Rangel in Caracas, Venezuela, were studied by the MIT and MSV assays. Nine samples (36%) were positive at 24 h, 10 (40%) were positive at 48 h and six (24%) were positive at 72 h by the MSV assay. With the MIT assay, 76% were positive at six days post inoculation and 12% were positive at 12 and 18 days post inoculation. One sample that was negative according to the MSV assay was positive with MIT on the 12th day. The MSV procedure exhibited a sensitivity of 96.2%, a specificity of 100%, a positive predictive value of 100% and a negative predictive value 80%. This procedure allowed for rapid rabies virus detection. MIT can be employed as an alternative method in laboratories without tissue culture facilities.

Casos de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna oral antipoliomielítica en Cuba (1963-2006) / Cases of paralytic poliomyelitis associated with oral antipoliomielytis vaccine in Cuba (1963-2006)

Objetivo: divulgar los indicadores de poliomielitis paralítica asociada encontrados en 44 años en niños vacunados con oral antipoliomielítica, suministrada exclusivamente en campañas masivas de vacunación durante el período de 1963 a 2006 y reportar el riesgo de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna con relación a diferentes aspectos epidemiológicos. Métodos: se realizó un estudio retrospectivo en 596 casos de parálisis fláccida aguda en niños ingresados en hospitales pediátricos, basado en investigaciones virológicas y detección de diferentes variables epidemiológicas. Resultados: de 113 pacientes estudiados se aislaron 120 agentes virales y 30 fueron identificados como poliovirus. Los datos clínicos y epidemiológicos en 596 casos de parálisis fláccida aguda permitieron categorizar a 20 niños afectados con poliomielitis paralítica asociada a la vacuna. Todos los casos se presentaron en niños menores de un año, vacunados con oral antipoliomielítica con estrategias de campañas masivas de vacunación exclusivamente y 19 fueron producidos por la primera dosis. El riesgo global en los niños vacunados con primera dosis de 1963 a 2006 fue 1 en 379 888 (7 217 866 dosis administradas/19 casos con poliomielitis paralítica asociada a la vacuna). Los casos de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna se han presentado esporádicos o en un grupo de 8 casos en el período 1989-1992. El riesgo de primera dosis en casos esporádicos fue 1 en 612 864 y en el grupo de 1 en 84 670. El riesgo en casos agrupados es 7,2 veces mayor que los ocurridos en casos aislados. Particularmente en el año 1992, que coincidió con una epidemia de neuropatía epidémica, el riesgo fue de 1 en 52 140, lo que representó un incremento de 11,8 veces a lo ocurrido en casos esporádicos. Los niños de 4-7 meses de edad también tuvieron un riesgo mayor que fue 1 en 132 812. Conclusiones: se identificaron aspectos epidemiológicos que incrementaron el riesgo de poliomielitis paralítica asociada a la vacuna, en los cuales coinciden aspectos de deficiencias nutricionales.

Aim: to disseminate the indicators of associated paralytic poliomyelitis found during 44 years in children that received the oral antipoliomyelitis vaccine, which was only administered in massive vaccination campaigns from 1963 to 2006, and to report the risk of vaccine-associated paralytic poliomyelitis as regards different epidemiological aspects. Methods: a retrospective study was undertaken in 596 cases of acute flaccid paralysis in children admitted in pediatric hospitals, based on virology researches, and on the detection of different epidemiological variables. Results: 120 viral agents were isolated from 113 studied patients. 30 were identified as poliovirus. The clinical and epidemiological data from 596 cases of acute flaccid paralysis allowed to categorize 20 children affected with vaccine-associated paralytic poliomyelitis. All the cases were children under one that were exclusively administered the oral antipoliomyelitis vaccine through the strategy of the massive vaccination campaigns. 19 of them were caused by the first dose. Global risk in children vaccinated with the first dose from 1963-2006 was of one in 379 888 (7 217 866 doses administered/19 cases with vaccine-associated paralytic poliomyelitis). Cases of vaccine-associated paralytic poliomyelitis have been sporadic or in a group of 8 cases during 1989-1992. The risk of first dose in sporadic cases was of one in 612 864, and in the group of 1 in 84 670. The risk of grouped cases is 7.2 times higher than those occurred in isolated cases. Particularly, in 1992, coinciding with an outbreak of epidemic neuropathy, the risk was of one in 52 140, which represented an increase of 11.8 times compared with sporadic cases. Children aged 4-7 months old also had a higher risk of 1 in 132 812. Conclusions: there were identified epidemiological aspects that augmented the risk of vaccine-associated paralytic poliomyelitis, in which the aspects of nutritional deficiencies coincided.

Secuencias de infección viral asociadas a la fiebre del dengue durante la epidemia de dengue 3 en la ciudad de La Habana, 2001-2002 / Viral infection sequences related to dengue fever in dengue 3 epidemics occurred in the City of Havana, 2001-2002

Objetivo: estudiar el papel de la infección secundaria y de la influencia de determinadas secuencias de infección virales en los casos de fiebre del dengue durante la epidemia de dengue 3, en la ciudad de La Habana, 2001-2002. Métodos: se estudiaron 141 muestras clínicas de casos confirmados de dengue en la epidemia cubana dengue 3. Todos los casos incluidos fueron clasificados de acuerdo con el criterio de la OMS como casos de fiebre del dengue, 101 de estas muestras fueron colectadas en la fase aguda de la enfermedad y 40 colectadas en la fase convaleciente tardía (16-18 meses después de la enfermedad). Resultados: los sueros colectados en la fase convaleciente tardía permitieron conocer las secuencias virales de infección, las cuales en orden descendiente fueron DEN-1/DEN-3, DEN-2/DEN-3 y DEN-1/DEN-2/DEN-3. Conclusiones: los resultados confirman que la secuencia de infección DEN-2/DEN-3 estuvo asociada a los casos de fiebre del dengue y no a los de fiebre hemorrágica del dengue; un porcentaje elevado de los casos estudiados se correspondió con una infección secundaria.

Objective: To study the role of secondary infection and of certain viral infection sequences in dengue fever cases during the dengue 3 epidemics occurred in the City of Havana. Methods: One hundred and forty one laboratory-confirmed clinical samples from dengue 3 cases were studied. According to WHO criteria, all included cases were classified as dengue fever cases; 101 of these samples were collected at the acute phase of the disease whereas 40 were collected in the late convalescence (16 to 18 months after the onset of disease). Results: The late convalescence serum samples allowed identifying the viral dengue infection sequences, which in downward order were DENV-1/DENV-3, DENV-2/DENV-3 and DENV-1/DENV-2/DENV-3. Conclusions: The results confirmed that the sequence infection DENV-2 / DENV-3 was associated with Dengue Fever Cases but not with the Dengue Hemorrhagic Fever Cases and that a high percentage of studied cases proved to be secondary infection.

Caracterización microbiológica de cepas de Vibrio cholerae no-O1 aisladas en Cuba / Microbiological characterization of non-01 Vibrio cholerae isolated in Cuba

Se estudiaron 422 cepas de Vibrio cholerae no-O1 procedentes de 9 provincias del país, de ellas 9 aisladas de un brote de enfermedad de transmisión hídrica. En la totalidad de las cepas se determinó la susceptibilidad antimicrobiana y la presencia de factores de virulencia. En las 9 cepas procedentes del brote, se realizó además, el estudio de macrorrestricción de ADN mediante la técnica de electroforesis de campo pulsado. Se demostró por primera vez en Cuba y el Caribe, la circulación de cepas de V. cholerae no-O1 atípicas (resistentes al compuesto vibriostático O129 y al trimetoprim-sulfametoxazol). El comportamiento de la susceptibilidad antimicrobiana demostró por primera vez la circulación en Cuba de 2 patrones diferentes de resistencia (ampicilina, trimetoprim/sulfametoxazol, sulfonamida y tetraciclina, trimetoprim/sulfametoxazol, sulfonamida). La frecuencia de cepas resistentes al trimetoprim-sulfametoxazol se mantuvo similar en todo el período de estudio. Sin embargo, se produjo un decrecimiento de la resistencia a la ampicilina y un aumento de la resistencia a la tetraciclina. Los principales factores de virulencia que se encontraron fueron la gelatinasa, la hemolisina, la elastasa y la adherencia a células HEp-2. Sin embargo, las cepas del brote mostraron mayores porcentajes que el resto, para la presencia de la toxina termoestable y la presencia de fimbrias. Los resultados de los estudios molecular y epidemiológico permitieron dar una respuesta acelerada y precisa sobre la etiología del primer brote de enfermedad de transmisión alimentaria.

The study of 422 non-01 Vibrio cholerae strains from nine provinces, 9 of them isolated from a water-borne disease outbreak, was performed. All the strains exhibited antimicrobial susceptibility and virulence factors. The nine strains from the outbreak were subjected to a DNA macrorestriction study based on the pulsed field electrophoresis technique. For the first time in Cuba and the Caribbean, the circulation of atypical non-01 V. Cholerae strains (resistent to vibriostatic compound 0129 and trimethoprim/sulfamethoxazole). The behavior of antimicrobial susceptibility evinced for the first time the circulation of two different resistence patterns in Cuba (ampicilline, trimethoprim/sulfamethoxazole, sulfonamide and tetracycline, trimethoprim/sulfamethoxazole, sulfonamide). The frequency of trimethoprim/sulfamethoxazole-resistent strains was similar during the whole period of study. However, resistance to ampicilline decreased whereas resistance to tetracycline increased. The main found virulence factors were gelatinase, hemolysine, elastase and adherence to Hep-2 cells. On the other hand, the outbreak strains showed higher percentages than the others due to the presence of heat-liable toxin and fimbriae. The results of the molecular and epidemiological studies allowed giving a speedy and accurate response that explained the etiology of the first food-borne disease outbreak.

Factores de virulencia asociados a la enteropatogenicidad en cepas de Aeromonas spp. aisladas de niños con diarrea en Mérida, Venezuela / Factors of virulence associated with entero-pathogenicity in strains of Aeromonas spp isolated from children with diarrhea in Mérida, Venezuela

Se estudiaron las heces de 397 pacientes con enfermedad diarreica aguda, y las de 121 pacientes sin diarrea que conformaron el grupo control , en el estado de Mérida, Venezuela , entre junio de 1993 y diciembre de 1994. El género Aeromonas fue identificado en los pacientes con enfermedad diarreica aguda en 11,83 por ciento y 5,78 por ciento se identificó en los pacientes del grupo control. Al estudiar los factores de virulencia descritos para Aeromonas (enterotoxina, citotoxina, hemaglutininas, hidrofobicidad celular y actividad hemolítica) en las cepas aisladas, se detectó que todas poseían al menos uno de los factores investigados asociados a la enteropatogenicidad. De las especies aisladas, Aeromonas caviae resultó ser la que se identificó con mayor frecuencia. Todos estos resultados sugieren que las especies de Aeromonas son patógenos entéricos potenciales en esta población

Amplificación dependiente de anticuerpos del virus dengue en cepas cubanas utilizando anticuerpos monoclonales / Dengue virus antibodies dependent amplification in Cuban strains by using monoclonal antibodies

Se describieron los diferentes comportamientos de anticuerpos monoclonales anti-dengue serotipo 2 (H3/6, 4G3) y anti-proteína recombinante de la envoltura del virus dengue cuando fueron enfrentados a diferentes cepas de los serotipos 2 y 4 de este virus (D2 Nueva Guinea C, A15 cepa cubana y A15 propagada 53 veces en cultivo de riñón de perro Beagly y D4 H-2412 cepa prototipo) en un ensayo de inmunoamplificación dependiente de anticuerpos. Los anticuerpos monoclonales han demostrado ser una herramienta eficaz para explicar que la neutralización y el incremento de la multiplicidad viral pueden realizarse como funciones biológicas separadas. Solamente el AcM H3/6 fue capaz de producir el fenómeno amplificación dependiente de anticuerpos frente a la cepa A15 con un incremento significativo en la multiplicación viral. Los AcMs 4G3 y 4B6 no fueron capaces de inmunoamplificar la multiplicación viral de las cepas estudiadas.

The different behaviors of antidengue monoclonal antibodies serotype 2 (H3/6, 4G3) and antiprotein recombinant from the dengue virus sheath were described when they faced diverse strains from the serotypes 2 and 4 of this virus (D2 New Guinea C, A15 Cuban strain and A15 propagated 53 times in culture of Beagley dog kidney and D4 H-22412 prototype strain) in an immunoamplification assay dependent of antibodies. Themonoclonal antibodies have prove to be an efficient tool to explain that the neutralizatrion and increase of viral multiplicity may be carried out as separate biological functions. Only the H3/6 monoclonal antibdoy was capable of producing the amplification assay dependent phenomenon against the A15 strain with a significant rise in the viral multiplication. The 4G3 and 4B6 monoclonal antibodies were not capable of immunoamplifying the viral multiplication of the studied strains.

Obtención y caracterización de una línea celular diploide de riñón humano / Obtention and characterization of a diploid cell line of human kidney

Se obtuvo una nueva línea celular diploide de riñón embrionario humano mediante subcultivos seriados (Mag) a partir de un cultivo primario. Se preparó aplicando la técnica de explanto en lugar de la clásica digestión enzimática con tripsina. El proceso de estabilización de la línea diploide luego del ôcultivo secundarioö se alcanzó entre los pases 6 y 7. Fueron probados 3 medios de cultivo durante el proceso, demostrándose que solo el MEM fue completamente satisfactorio. Las características biológicas de la nueva línea fueron: morfología fibroblástica, medio de cultivo Eagle MEM con 10 por ciento de SBF, split 1:2 a 1:3, cariotipo humano normal, viabilidad poscongelación de 60 por ciento, libre de contaminantes y no tumorigénica. Los subcultivos 11-13 de Mag criopreservados fueron estudiados desde el punto de vista de su utilidad para el diagnóstico de diferentes grupos virales

Aeromonas: an emerging pathogen associated with extraintestinal infection in Cuba

Se evaluó una paciente de 87 años con antecedentes de cardiopatía que había estado presentando disnea y fiebre durante 2 meses. Un estudio bacteriológico resultó ser positivo a Aeromonas hydrophila en el contexto de un cáncer de pulmón existente. El estudio fue negativo para los bacilos ácidos rápidos.

An 87 years-old female with a history of heart disease who has been presenting dysnea and fever for 2 months was evaluated. A sputum bacteriological study proved positive for Aeromonas hydrophila in the context of an existing lung cancer. The study was negative for acid fast bacilli.

Detección de anticuerpos antirrábicos en personal de riesgo con el empleo de la técnica de neutralización por reducción del número de placas / Detection of antirabic antibodies in personnel at risk through the use of the neutralization technique by reducing the number of plaques

Se empleó la técnica de neutralización por reducción del número de placas (NRNP) para la detección de anticuerpos antirrábicos en personal de riesgo. Se estudiaron muestras de suero de individuos de alto riesgo y personas con antecedentes de vacunación y sin estos. La técnica de neutralización fue comparada con la prueba biológica en ratón y como resultado del estudio se obtuvo una concordancia de 100 por ciento. Se encontró que el sexo no influye en la respuesta de anticuerpos a este virus, aunque el contacto directo y la cantidad de veces que el individuo ha recibido la vacuna actúan positivamente en la respuesta inmune. La introducción de esta técnica en el laboratorio permite contar con una herramienta útil, en el seguimiento del personal que recibe vacunación preexposición y posexposición al virus rábico

Neumonía hemorrágica por Influenza virus: diagnóstico virológico / Hemorrhagic pneumonia caused by influenza virus: virological diagnosis

The paper presents the case of a female patient who was admitted to "Calixto GarcÝa" General Hospital with respiratory distress and hypovolemic or septic shock. She was diagnosed with viral hemorrhagic pneumonia. From the endotracheal secretion taken as a sample, the influenza virus was isolated as etiological agent, which, through the hemaglutination inhibition technique, was characterized as a strain belonging to H3N2 subtype, very similar to strain A/Johannesburg/33/94 from the antigenic viewpoint. The patient recovered satisfactorily after being treated with rivabirin.

Plesiomonas shigelloides una Vibrionaceae en quien pensar / Plesiomonas shigelloides, a Vibrionaceae to be taken into account

The antigenic structure and antimicrobial susceptibility were studied in 99 strains isolated from patients with acute diarrhea (6 strains from an outbreak of digestive transmission disease in Santiago de Cuba) and a strain isolated from a patient who died from infections neurological syndrome (INS, meningitis). Four new serotypes (093, 994, 095, 096), which had not been described in the world classification, were identified from the Cuban isolated strains and were included in the International Serotyping Scheme by the International Reference Center located in Prague, Czech Republic. For the first time in Cuba, the circulation of serotypes 017:H11, 011: H2, 023. H1alc, 057: H3 which show cross reaction to Shiguella species was proved. Those strains from the outbreak of digestive disease belonged to serotype 050: H11 and had a thermostable toxin. The first case of infectious neurologic syndrome with Plesionomas shigelloides etiology reported in Cuba was described; the strain corresponded to serotype 050: H11. The worldwide reported pattern of antimicrobial resistance was demonstrated.

Estudio de algunas propiedades biológicas de 3 cepas de dengue 2 con diferencias en sus secuencias nucleotídicas / Study of various biological properties of 3 strains of dengue 2 with differences in their nucleotide sequences

Some biological properties of Dengue-2 strains such as A-15 (isolated in Cuba in 1981); Jamaica (isolated in Jamaica in 1981) and New Guinea "C" (NG"C") standard strain differing in their nucleotide sequences were studied. The results showed that the cytopathic effect in C6/36 HT cell line occurred earlier in A-15 strain and that fluorescence was first detected in Jamaica and A-15 strains. This seems to indicate that rapid detection of strains does not have any relation to neither their history of passage nor the original isolation system. A-15 and NG"C" strains exhibited an heterogeneous pattern formed by big and small plaques but average size of plaques in NG"C" was lower whereas Jamaica showed only small plaques. The most neurovirulent strain in mice was NG"G" followed by A-15 whereas Jamaica was not neurovirulent at all. These results indicate that A-15 has a different biological behaviour which is probably due to intrinsic differences. It should be taken into account that 7 amino acid changes were found in the envelope protein which may have affected the expression of some biological properties.

Determinación de verotoxinas en cepas de Escherichia coli O157: H7 / Determination of verotoxins in strains of Escherichia coli O157: H7

We performed an study to find out the main virulence factor in verotoxigenic Escherichia coli: the production of verotoxins in 50 non sorbitol-fermenting Escherichia coli strains (possible enterohemorrhage) which were isolated from children with acute diarrheas in the City of Havana and referred to the National Reference Laboratory for acute diarrheal diseases in "Pedro KourÝ" Institute. By using the agglutination technique with latex particles of E. coli O157:H7, we determined whether the verotoxins belonged to this serotype, we also researched the production of verotoxins in Vero cell culture. Ninety-six percent of the total number of strains were positive in the qualitative determination of this factor which was more frequently observed after 24 hours.

Analysis of respiratory syncytial virus in clinical samples by reverse transcriptase-polymerase chain reaction restriction mapping

The aim of this study was to develop a polymerase chain reation (PCR) for detection of respiratory syncytial virus (RSV) genomes. The primers were designed from published sequences and selected from conserved regions of the genome encoding for the N protein of subgroups A and B of RSV. PCR was applied to 20 specimens from children admitted to the respirary ward of "William Soler" Pediatric Hospital in Havana City with a clinical diagnosis of bronchiolitis. The PCR was compared with viral isolation and with an indirect immunofluorescence technique that employs monoclonal antibodies of subgroups A and B. Of 20 nasopharyngeal exudates, 10 were found positive by the three assayed methods. In only two cases, samples that yielded positive RNA-PCR were found negative by indirect immunofluorescence and cell culture. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, RNA-PCR had 100 per cent sensitivity and 80 per cent specificity. RNA-PCR is a specific and sensitive technique for the detection of the RSV genome. Technical advantages are discussed.

Normalización de un ensayo de ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgG al virus sincitial respiratorio

Se normalizó un ensayo de ultramicroELISA de doble anticuerpo para la detección de anticuerpos IgG al virus sincitial respiratorio (VSR), para ello se dispuso de un anticuerpo monoclonal antiproteína F del VSR, producido por el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de La Habana (CIGB). La utilización de este anticuerpo posibilitó la inclusión de preparaciones antigénicas crudas en lugar de fracciones purificadas, lo que disminuye notablemente la reactividad obtenida con el control de antígeno. Las condiciones del ensayo fueron determinadas mediante titulación cruzada y se obtuvo una sensibilidad de 97,2 %, un 91 % de coincidencia y una especificidad 83,3 % del UMELISA con respecto a la fijación del complemento. Los resultados pueden ser expresados cualitativamente o en títulos de anticuerpos empleando una sola dilución de suero (1:40) y una curva patrón.

An ultramicroELISA assay of double antibody for the detection of IgG antibodies to the respiratory syncytial virus (RSV) wasstandardized. It was used a RVS antiprotein F monoclonal antibody produced by the Genetic Engineering and Biotechnology Center (GEBC) in Havana. The use of this antibody allowed to include crude antigenic preparations instead of purified fractions, which caused a significant reduction of the reactivity obtained with the antigen control. The assay conditions were determined by crossed titration. It was obtained a sensitivity of 97.2 %, a coincidence of 91 %, and a specificity of 83.3 % of the UMELISA as regards the complement fixation. The results may be qualitatively expressed or by antibody titres using only one serum dillution (1:40) and a pattern curve.

Comparación de la línea NCI-H292 con otras líneas continuas para la multiplicación de virus respiratorios

La línea continua NCI-H292 de células mucoepidermoides de pulmón humano ha sido reportada ser de utilidad para la propagación de muchos virus, principalmente Adenovirus y Paramyxovirus. Se plantea la posible sustitución de cultivos primarios de riñón de mono por NCI-H292 para el aislamiento de dichos agentes. En el presente trabajo se evalúa la utilidad de esta nueva línea para la multiplicación de los virus sincitial respiratorio, Adenovirus 3 y 7 y los virus parainfluenza 1, 2 y 3 en comparación con las líneas celulares continuas utilizadas tradicionalmente para la propagación de éstos; para lo cual se inocularon cepas de los virus en cuestión en las líneas Vero, HEp-2 y HeLa, según sus sensibilidades conocidas, y en NCI-H292 paralelamente. La multiplicación viral se detectó por aparición de efecto citopático o por hemadsorción. Como resultado se corroboró la capacidad de multiplicación de la línea NCI-H292 para los Adenovirus 3 y 7 y el parainfluenza 3, siendo más útil para la multiplicación de éstos que las líneas tradicionalmente usadas.

The NCI-H292 continual line of mucoepidermoid cells of the human lungs has been reported to be useful for the propagation of many viruses, mainly Adenovirus and Paraxymovirus. It is stated the possible substitution of primary cultures of monkey kidney for NCI-H292 in order to isolate such agents. In the present paper it is evaluated the utility of this line for multiplying the respiratory syncytial viruses Adenovirus 3 and 7, and the parainfluenza viruses 1, 2, and 3, in comparison with the continual cellular lines traditionally used for the propagation of these viruses, whose strains were inoculated this time in the Vero, HEp-2, and HeLa lines, according to their know sensitivities as well as in NCI-H292 simultaneously. The viral multiplication was detected by the appareance of the cytopathic effect or by hemaadsorption. As a result, it was demostrated the multiplication capacity of the NCI-H292 line for Adenoviruses 3 and 7 and parainfluenza 3, being more useful for their multiplication than the tradicionally used lines.

Ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos monoclonales contra las proteínas E y NS1 del virus dengue

Se estandarizó un ELISA para la detección de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue. Se aplicó un ELISA indirecto utilizando como fuente de antígeno células C6/36 inoculadas con la cepa A-15 aislada durante la epidemia de dengue 2 en 1981. Estas células fueron fijadas en placas ELISA a una concentración de 200 000 células/pozo. Se utilizó un control celular en condiciones similares. Para normalizar el sistema se emplearon anticuerpos monoclonales específicos a ambas proteínas. Se realizaron estudios a diferentes tiempos de incubación para determinar el momento de mayor expresión de estas proteínas en la membrana celular. Los resultados muestran una respuesta máxima a las 72 horas posinoculación para ambas proteínas, se obtuvo una sensibilidad para la detección de NS1 de 14,7 ng/mL y para la E de 1,43 ng/mL. Este sistema permite el tamizaje primario de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue 2.